DAGLα Double Nickaseプラスミド (h): sc-402826-NIC

DAGLAは、ジアシルグリセロールから内因性カンナビノイドである2-アラキドノイルグリセロール（2-AG）を生成する反応を触媒する、膜結合型のセリン加水分解酵素であるジアシルグリセロールリパーゼα（DAGLα）をコードする。2-AGの利用可能量を制御することで、DAGLαはカンナビノイド受容体シグナル伝達とシナプス可塑性を調節し、リン脂質代謝を神経調節性シグナル伝達ネットワークに結び付けている。DAGLαの活性は、PLC依存的なジアシルグリセロールの代謝回転や、その下流にあるエイコサノイド／エンドカンナビノイドのバランスなど、脂質セカンドメッセンジャー経路とも連動している。DAGLAが関与するエンドカンナビノイドシグナル伝達の破綻や脂質恒常性の乱れは、神経発達・神経精神系の表現型に加え、より広い代謝および炎症生物学の文脈でも研究されてきた。

DAGLα ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における DAGLA 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、DAGLA内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、DAGLAの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、DAGLAが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。