Cytokeratin 13 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401320-ACT

KRT13 kodiert Zytokeratin 13, ein Intermediärfilamentprotein vom Typ I, das mit Typ-II-Keratinen heteropolymisiert, um die strukturelle Integrität und mechanische Widerstandsfähigkeit von Epithelien aufrechtzuerhalten. Es ist in mehrschichtigen, nicht verhornenden Epithelien angereichert und trägt zur Organisation des Zytoskeletts, zum Zell‑Zell‑Zusammenhalt sowie zu epithelialen Differenzierungsprogrammen bei, die die Barrierefunktion des Gewebes prägen. Veränderte KRT13-Expressionsmuster stehen mit epithelialem Remodeling und einer dysregulierten Differenzierung in Zusammenhang, wie sie bei plattenepithelialen Pathologien beobachtet werden, wodurch KRT13 ein nützlicher Marker zur Untersuchung epithelialer Zustandsübergänge ist. Als Bestandteil des Keratin‑Intermediärfilament-Netzwerks ist Zytokeratin 13 in Signalwege eingebunden, die die Zytoskelettdynamik und Stressantworten steuern und damit Zellmorphologie und Gewebearchitektur beeinflussen.

Cytokeratin 13 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen KRT13-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Cytokeratin 13 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des KRT13-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der KRT13-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Cytokeratin 13-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native KRT13-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Cytokeratin 13-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Cytokeratin 13-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem KRT13-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.