Cytokeratin 13 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401320-ACT

KRT13 codifica la citocheratina 13, una proteina dei filamenti intermedi di tipo I che eteropolimerizza con le cheratine di tipo II per mantenere l’integrità strutturale dell’epitelio e la sua resistenza meccanica. È arricchita negli epiteli stratificati non cheratinizzati e contribuisce all’organizzazione del citoscheletro, alla coesione cellula-cellula e ai programmi di differenziazione epiteliale che modellano la funzione di barriera dei tessuti. Alterazioni dei pattern di espressione di KRT13 sono associate al rimodellamento epiteliale e alla differenziazione disregolata osservati nelle patologie squamose, rendendolo un marcatore utile per studiare le transizioni di stato dell’epitelio. Come parte della rete di filamenti intermedi delle cheratine, la citocheratina 13 interagisce con vie che regolano la dinamica del citoscheletro e le risposte allo stress, influenzando la morfologia cellulare e l’architettura tissutale.

Cytokeratin 13 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di KRT13 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Cytokeratin 13 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus KRT13 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione KRT13, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Cytokeratin 13. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus KRT13 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Cytokeratin 13 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Cytokeratin 13 nelle cellule tumorali con espressione di KRT13 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.