CYP2J2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402955

Übersicht

CYP2J2 kodiert eine mikrosomale Cytochrom-P450-Monooxygenase, die die NADPH-abhängige Oxidation endogener Lipide und Xenobiotika katalysiert und eine ausgeprägte Epoxygenase-Aktivität gegenüber Arachidonsäure aufweist, wodurch Epoxyeicosatriensäuren (EETs) gebildet werden. Diese Metaboliten tragen zur Regulation des Gefäßtonus, der inflammatorischen Signalübertragung, der Zellproliferation und von Reaktionen auf oxidativen Stress bei und verknüpfen die CYP2J2-Aktivität mit Eicosanoid- und Lipidmediator-Signalwegen. Die Expression von CYP2J2 in kardiovaskulären und extrahepatischen Geweben stützt eine Rolle in der Endothelfunktion und der metabolischen Homöostase; eine veränderte Expression oder Aktivität wurde mit kardiometabolischen und inflammatorischen Phänotypen in Verbindung gebracht. In der Krebsbiologie wurde die CYP2J2-abhängige Lipidsignalgebung im Zusammenhang mit dem Überleben von Tumorzellen, Migration und dem Austausch mit dem Mikromilieu untersucht, was CYP2J2 zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien macht.

Das CYP2J2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CYP2J2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CYP2J2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CYP2J2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CYP2J2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CYP2J2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CYP2J2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CYP2J2-Exone abzielen, die für die CYP2J2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CYP2J2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CYP2J2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom CYP2J2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CYP2J2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CYP2J2 HDR-Plasmid (h) und CYP2J2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CYP2J2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CYP2J2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.