CYP2E1 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m): sc-419917-LAC

O gene murino Cyp2e1 codifica a CYP2E1, uma enzima microssomal do citocromo P450 que catalisa a oxidação de pequenas moléculas e de substratos endógenos em tecidos hepáticos e extra-hepáticos. A atividade da CYP2E1 está intimamente ligada à transferência de elétrons dependente de NADPH e pode aumentar a produção de espécies reativas de oxigênio, associando essa enzima ao estresse oxidativo, à peroxidação lipídica e à homeostase redox celular. Por meio de interações com o metabolismo de xenobióticos, a oxidação de ácidos graxos e a sinalização inflamatória, alterações na expressão de CYP2E1 são frequentemente investigadas em modelos de esteatose, lesão hepática induzida por toxicantes, resistência à insulina e neuroinflamação. Como regulador da bioativação metabólica e de respostas ao estresse, o Cyp2e1 é amplamente estudado por seu impacto na função mitocondrial, no estresse do RE e em programas transcricionais que moldam a suscetibilidade dos tecidos a lesões.

As Partículas de Ativação Lentivirais CYP2E1 (m) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Cyp2e1 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais CYP2E1 (m) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Cyp2e1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de CYP2E1. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Cyp2e1 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.