CYP2E1 Lentiviral Activation Particles (m): sc-419917-LAC

Maus-Cyp2e1 kodiert CYP2E1, ein mikrosomales Cytochrom-P450-Enzym, das die Oxidation kleiner Moleküle und endogener Substrate in hepatischen und extrahepatischen Geweben katalysiert. Die CYP2E1-Aktivität ist eng mit dem NADPH-abhängigen Elektronentransfer verknüpft und kann reaktive Sauerstoffspezies erhöhen, wodurch dieses Enzym mit oxidativem Stress, Lipidperoxidation und der zellulären Redox-Homöostase in Verbindung steht. Über Wechselwirkungen mit dem Xenobiotika-Metabolismus, der Fettsäureoxidation und inflammatorischen Signalwegen wird eine veränderte CYP2E1-Expression häufig in Modellen der Steatose, toxikantieninduzierter Leberschädigung, Insulinresistenz und Neuroinflammation untersucht. Als Regulator der metabolischen Bioaktivierung und von Stressantworten wird Cyp2e1 umfassend hinsichtlich seiner Auswirkungen auf die mitochondriale Funktion, ER-Stress und Transkriptionsprogramme erforscht, die die Anfälligkeit von Geweben für Schädigungen mitbestimmen.

CYP2E1 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Cyp2e1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

CYP2E1 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Cyp2e1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen CYP2E1-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Cyp2e1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.