CYP2E1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401357-ACT

ヒトCYP2E1は、エタノール、アセトン、さまざまな異物（キセノバイオティクス）を含む小分子・低分子量基質の酸化を触媒するシトクロムP450モノオキシゲナーゼをコードし、肝臓の代謝能を形成する。NADPH依存的な電子伝達およびレドックス恒常性との連関を介して、CYP2E1活性は活性酸素種（ROS）や脂質過酸化を増加させうるため、細胞ストレス応答や炎症シグナル伝達との関連が示されている。CYP2E1は薬物代謝および化学発がん経路に組み込まれており、肝障害、脂肪性肝炎、毒性物質による肝毒性の文脈で頻繁に研究されている。CYP2E1の発現変動は、薬理学や環境曝露生物学に関わる異物クリアランスおよび代謝物生成の個体差にも影響する。

CYP2E1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CYP2E1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CYP2E1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CYP2E1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCYP2E1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CYP2E1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCYP2E1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCYP2E1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCYP2E1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCYP2E1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。