Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
CYP27B1 Plasmide Double Nickase (h): sc-401155-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CYP27B1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CYP27B1 Double Nickase Plasmid (h) e il CYP27B1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CYP27B1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CYP27B1 Antibody (G-5): sc-515903
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CYP27B1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-401155-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CYP27B1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401155-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CYP27B1 codifica la 25-idrossivitamina D-1α-idrossilasi mitocondriale, l’enzima chiave che converte la 25-idrossivitamina D nell’ormone attivo 1,25-di-idrossivitamina D (calcitriolo). Controllando l’abbondanza di calcitriolo, CYP27B1 regola i programmi di segnalazione del recettore della vitamina D (VDR) che influenzano l’omeostasi di calcio e fosfato, la mineralizzazione ossea e ampie reti trascrizionali nelle cellule immunitarie ed epiteliali. La sua attività collega il metabolismo degli steroli alla segnalazione endocrina e ai processi redox mitocondriali, con effetti a valle su differenziamento, tono infiammatorio e biologia delle barriere. Un’espressione o una funzione deregolata di CYP27B1 è associata a disturbi del metabolismo della vitamina D ed è stata studiata in contesti che includono fenotipi scheletrici, suscettibilità all’autoimmunità, infiammazione cronica e alterazioni della segnalazione nel microambiente tumorale.
CYP27B1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CYP27B1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CYP27B1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CYP27B1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CYP27B1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.