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CYP21A2慢病毒激活颗粒(h) | sc-402919-LAC | 200 µl | $455.00 |
CYP21A2 编码细胞色素 P450 21-羟化酶,这是一种与内质网相关的单加氧酶,在肾上腺类固醇生成过程中催化关键的 21-羟化步骤,包括将孕酮和 17α-羟孕酮转化并导向盐皮质激素和糖皮质激素的生物合成。该酶在血红素依赖的 P450 氧化还原化学反应体系中发挥作用,并整合于由胆固醇衍生的激素通路之中,这些通路共同塑造肾上腺分区(分带)、内分泌反馈以及细胞代谢状态。CYP21A2 活性改变与先天性肾上腺皮质增生(CAH)的多种表型密切相关,为在相关细胞模型中研究类固醇前体的堆积、皮质醇/醛固酮生成受损及其下游信号效应提供了分子切入点。由于 CYP21A2 位于一个复杂的基因组区域,邻近高度同源的假基因 CYP21A1P,在机制研究中往往需要对该位点进行精确、特异性的调控与解析。
CYP21A2 慢病毒激活颗粒(h)通过将完整的协同激活介导体(SAM)转录激活系统包装到可直接转导的高滴度慢病毒颗粒中,满足了这一需求,从而能够在更广泛的人类细胞类型中高效上调 CYP21A2 表达。
CYP21A2 慢病毒激活颗粒(h)通过慢病毒转导递送协同激活介导体(SAM)系统的所有功能组分。该系统包含三种共同转导至靶细胞的颗粒制剂:一种编码与VP64转激活域融合的无催化活性的dCas9(D10A和N863A突变),并携带布拉西定抗性基因; 一种编码MS2-p65-HSF1融合蛋白并携带潮霉素抗性基因的制剂;以及一种编码靶标特异性20 nt sgRNA(与两个MS2 RNA适配体融合)并携带嘌呤霉素抗性基因的制剂。经过慢病毒转导和表达盒的基因组整合后,SAM组分得以稳定表达,并在CYP21A2转录起始位点上游的近端启动子区域内的靶位点组装。在此处,VP64、p65和HSF1协同作用,招募内源性转录 machinery,从而驱动内源性CYP21A2表达的持续上调。使用无核酸酶活性的 dCas9 可避免引入双链 DNA 断裂,并保留原生的 CYP21A2 基因组位点和调控架构。
慢病毒载体具有多项实用优势:稳定的基因组整合支持细胞分裂过程中的可遗传激活;高滴度颗粒制剂免去了内部病毒生产的需要;且与原代细胞、非增殖细胞及转染抗性细胞类型的兼容性,扩大了实验的可及性。可通过嘌呤霉素、潮霉素和布拉西定进行三重抗生素筛选,以确认并富集成功的转导。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。