CYP21A2 Lentiviral Activation Particles (h): sc-402919-LAC

CYP21A2 kodiert die Cytochrom‑P450‑21‑Hydroxylase, eine mit dem endoplasmatischen Retikulum assoziierte Monooxygenase, die zentrale 21‑Hydroxylierungsschritte in der adrenalen Steroidogenese katalysiert, einschließlich der Umwandlung von Progesteron und 17α‑Hydroxyprogesteron in Richtung der Mineralokortikoid‑ und Glukokortikoid‑Biosynthese. Dieses Enzym arbeitet innerhalb der hämabhängigen P450‑Redoxchemie und ist in cholesterinbasierte Hormonwege eingebunden, die die Zonierung der Nebenniere, endokrine Rückkopplung und den zellulären Stoffwechselzustand prägen. Eine veränderte CYP21A2‑Aktivität ist stark mit Phänotypen der kongenitalen Nebennierenhyperplasie verknüpft und bietet einen molekularen Ansatzpunkt, um die Anreicherung von Steroidvorstufen, eine gestörte Cortisol-/Aldosteronproduktion sowie nachgeschaltete Signaleffekte in relevanten Zellmodellen zu untersuchen. Da CYP21A2 in einer komplexen genomischen Region in der Nähe des hoch homologen Pseudogens CYP21A1P liegt, ist für mechanistische Studien häufig eine präzise Untersuchung der loci‑spezifischen Regulation wichtig.

CYP21A2 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente CYP21A2-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

CYP21A2 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der CYP21A2-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen CYP21A2-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen CYP21A2-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.