Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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CYP1A1 Double Nickase Plasmid (h): sc-400511-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CYP1A1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CYP1A1 Double-Nickase-Plasmid (h) und CYP1A1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CYP1A1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: CYP1A1: sc-25304
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CYP1A1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400511-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CYP1A1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400511-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CYP1A1 (Cytochrom P450 1A1) ist eine xenobiotika-metabolisierende Monooxygenase, die die oxidative Biotransformation polyzyklischer aromatischer Kohlenwasserstoffe und anderer planarer aromatischer Verbindungen katalysiert. Seine Expression wird stark über die Signalachse des Aryl-Hydrocarbon-Rezeptors (AHR) reguliert und verknüpft damit die Exposition gegenüber Umweltliganden mit Transkriptionsprogrammen, die das zelluläre Redoxgleichgewicht und metabolische Stressantworten prägen. Die CYP1A1-Aktivität kann reaktive Zwischenprodukte erzeugen und oxidativen Stress modulieren, mit nachgeschalteten Effekten auf die DNA-Schadenssignalgebung und entzündliche Signalwege. Eine veränderte Regulation und Induzierbarkeit von CYP1A1 wurde im Kontext der Anfälligkeit gegenüber Toxikanten, des Karzinogenstoffwechsels und interindividueller Unterschiede in der chemischen Empfindlichkeit untersucht.
CYP1A1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CYP1A1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CYP1A1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CYP1A1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CYP1A1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.