CYFIP2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-429445

Übersicht

Cyfip2 kodiert CYFIP2, einen zytoplasmatischen Effektor, der die Rac1-Signalübertragung mit dem Umbau des Aktin-Zytoskeletts und der Kontrolle der Translation koppelt – über Interaktionen mit dem WAVE-Regulationskomplex und mit FMRP-assoziierten Ribonukleoprotein-Komplexen. In Neuronen trägt CYFIP2 zur Dynamik des Wachstumskegels, zur Reifung dendritischer Dornen (Spines) und zur synaptischen Plastizität bei, indem es die Arp2/3-vermittelte Aktinpolymerisation mit der aktivitätsabhängigen Proteinsynthese koordiniert. Dadurch ist CYFIP2 an der Schnittstelle zwischen Zytoskelettorganisation und RNA-Stoffwechsel positioniert und mit Signalwegen verknüpft, die der neuronalen Konnektivität und der Funktion exzitatorischer Synapsen zugrunde liegen. Eine veränderte CYFIP2-Aktivität wurde in genetischen und funktionellen Studien mit neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen sowie einer erhöhten Anfallsanfälligkeit in Verbindung gebracht, was ihre Relevanz für mechanistische Modellierungen in Maus-Systemen unterstreicht.

Das CYFIP2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Cyfip2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Cyfip2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Cyfip2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CYFIP2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Cyfip2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CYFIP2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Cyfip2-Exone abzielen, die für die CYFIP2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Cyfip2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CYFIP2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom CYFIP2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Cyfip2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CYFIP2 HDR-Plasmid (m) und CYFIP2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Cyfip2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Cyfip2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.