Plásmido Doble Nickase (h) cyclin A: sc-400119-NIC

CCNA2 codifica la ciclina A, un regulador central de la progresión del ciclo celular que coordina la actividad de las CDK durante la fase S y la transición G2/M. Los complejos ciclina A–CDK2 y ciclina A–CDK1 modulan la activación de los orígenes de replicación del ADN, la duplicación de los centrosomas y la señalización de puntos de control para asegurar una duplicación genómica precisa y la entrada en mitosis. La expresión de CCNA2 está estrechamente controlada por programas transcripcionales dependientes de E2F y por proteólisis mediada por ubiquitina a través de APC/C, vinculando la abundancia de ciclina A con el estrés replicativo y las respuestas al daño del ADN. La actividad desregulada de CCNA2 se asocia con frecuencia a un control alterado de la proliferación y a inestabilidad genómica, por lo que es un foco habitual en estudios sobre los circuitos oncogénicos del ciclo celular y las aberraciones cromosómicas.

cyclin A El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CCNA2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CCNA2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CCNA2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CCNA2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.