CXCR-7 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403187-ACT

ACKR3 (CXCR-7) codifica um receptor atípico de quimiocinas que se liga a CXCL12/SDF-1 e CXCL11, atuando principalmente como sequestrador de ligantes e modulador de sinalização, em vez de um receptor quimiotático canônico acoplado a Gαi. Ao moldar gradientes de quimiocinas e a comunicação cruzada entre receptores, o CXCR-7 influencia programas de migração, sobrevivência e adesão dependentes de CXCR4 e impacta vias a jusante, incluindo MAPK/ERK e sinalização associada à β-arrestina. Em tecidos humanos, o ACKR3 contribui para a dinâmica do tráfego vascular e de células imunes, sendo frequentemente investigado em contextos como inflamação, invasão de células tumorais, biologia de metástase e angiogênese. Sua expressão e atividade também são estudadas no desenvolvimento e no remodelamento tecidual, onde a disponibilidade de quimiocinas é um fator limitante para o posicionamento celular.

CXCR-7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ACKR3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CXCR-7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ACKR3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ACKR3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CXCR-7. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ACKR3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CXCR-7 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CXCR-7 em células tumorais com expressão de ACKR3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.