CTGF CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400091-ACT

結合組織増殖因子（CTGF/CCN2）は分泌型のマトリセルラータンパク質であり、細胞外マトリックス（ECM）のリモデリングと増殖因子シグナル伝達を統合して、細胞接着、遊走、増殖、ならびに線維化関連遺伝子プログラムを制御する。CTGFはTGF-βや機械的刺激によって誘導され、SMADシグナル、インテグリン介在性接着、MAPKとのクロストーク、さらにYAP/TAZを介したメカノトランスダクションなどの経路を調節する。これらの機能を通じてCTGFは、コラーゲン沈着、筋線維芽細胞の活性化、血管新生応答に影響を与え、組織修復および間質リモデリングのあり方を規定する。CTGF発現の制御不全は病的線維化や腫瘍関連間質の進展と関連しており、ECM生物学の研究において広く用いられる分子リードアウトであると同時に、駆動因子としても位置づけられている。

CTGF CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CTGFの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CTGF CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CTGF 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCTGF転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CTGFの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCTGF遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCTGF依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCTGF発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCTGF経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。