cSHMT Plasmide Double Nickase (h): sc-403678-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- cSHMT Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il cSHMT Double Nickase Plasmid (h) e il cSHMT Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira SHMT1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: cSHMT Antibody (A-2): sc-365203
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
cSHMT Plasmide Double Nickase (h) | sc-403678-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
cSHMT Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403678-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SHMT1 umano codifica la serina idrossimetiltransferasi citosolica (cSHMT), un enzima dipendente dal fosfato di piridossale che interconverte serina e glicina generando al contempo 5,10-metilentetraidrofolato per il metabolismo a un carbonio. Fornendo unità di carbonio derivate dai folati, la cSHMT sostiene la biosintesi di timidilato e purine, la capacità di metilazione dipendente dalla S-adenosilmetionina e l’omeostasi redox tramite il collegamento al ciclo dei folati. L’attività di SHMT1 è quindi strettamente connessa alla replicazione e alla riparazione del DNA, alla regolazione epigenetica e al coordinamento metabolico mitocondrio–citosol. Un’alterata espressione o funzione di SHMT1 è stata associata alla disregolazione della via dei folati osservata nei disturbi proliferativi e alla suscettibilità a fenotipi legati all’instabilità genomica in modelli cellulari.
cSHMT Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SHMT1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SHMT1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SHMT1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SHMT1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.