Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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creatine kinase-M Double Nickaseプラスミド (h): sc-401132-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- creatine kinase-M Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- creatine kinase-Mダブルニカースプラスミド（h）およびcreatine kinase-Mダブルニカースプラスミド（h2）は、CKMを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: creatine kinase-M 抗体 (G-9): sc-365046
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
creatine kinase-M Double Nickaseプラスミド (h) | sc-401132-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
creatine kinase-M Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-401132-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CKMは筋型クレアチンキナーゼ（creatine kinase-M）をコードしており、細胞質に存在するリン酸基転移酵素として、ATPとクレアチンの間でリン酸を可逆的に転移させます。これにより、エネルギー需要が変動する状況下でもATPを緩衝し、迅速に再生することができます。この反応はホスホクレアチン・シャトルの中核を成し、解糖系および酸化的リン酸化によるATP産生と、筋原線維におけるATP消費とを結び付け、筋収縮とより広範な細胞エネルギー恒常性を支えます。CKM活性はクレアチン／ホスファゲン代謝に寄与し、骨格筋分化、ストレス応答、ミトコンドリア機能に関する研究において、生化学的・分子学的指標として一般的に用いられます。クレアチンキナーゼのシグナル伝達の破綻やCKM発現の変化は、筋損傷や代謝異常と関連付けられており、ミオパチーや関連するエネルギー不足表現型の機序解明において重要な標的となります。
creatine kinase-M ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CKM 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CKM内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CKMの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CKMが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。