Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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creatine kinase-M CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h2): sc-401132-KO-2
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- creatine kinase-M CRISPR/Cas9 ノックアウト（KO）プラスミド（h2）は、GeCKO v2ライブラリ由来の配列を用いて最大のノックアウト効率を実現するよう設計された、Cas9ヌクレアーゼおよび標的特異的な20塩基対のガイドRNA（gRNA）をそれぞれコードするプラスミドのプールです
- gRNA配列は、Cas9を誘導してcreatine kinase-Mゲノム座において部位特異的な二本鎖切断（DSBs）を引き起こし、非相同末端結合（NHEJ）を介して遺伝子ノックアウトをもたらします
- ピューロマイシン耐性遺伝子とRFP遺伝子はLoxP部位で挟まれているため、安定したノックアウト細胞株を樹立した後、Creリコンビナーゼ（Creベクター：sc-418923）を用いて選択マーカーを除去することができる。
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: creatine kinase-M 抗体 (G-9): sc-365046
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
creatine kinase-M CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h2) | sc-401132-KO-2 | 20 µg | $397.00 |
概要
CKMはクレアチンキナーゼM（CK-M）をコードしており、これは細胞質に存在するリン酸基転移酵素です。ホスホクレアチンからADPへリン酸基を可逆的に転移してATPを再生し、需要が変動する状況下でも細胞内のエネルギー状態（energy charge）を緩衝します。CK-Mは骨格筋および心筋に高発現しており、筋線維において解糖系、酸化的リン酸化、ならびにホスホクレアチンシャトルを介したエネルギー輸送と連動してATP恒常性を支えます。CKM活性の変化は筋収縮能や代謝ストレス応答に影響を及ぼし、筋疾患、筋損傷、心代謝リモデリングの研究で頻繁に評価されます。またCKMは、横紋筋モデルにおけるエネルギー適応、ミトコンドリア機能、レドックス関連シグナル伝達を検討するための機序上の重要な結節点としても位置づけられます。
creatine kinase-M CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）は、human細胞株におけるCKM遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CKM内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。
このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CKMのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、creatine kinase-Mタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。
このCRISPRノックアウトシステムにより、creatine kinase-Mシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CKM欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。
主な特徴
- creatine kinase-Mの機能に不可欠なCKMエクソンを標的とするsgRNA
導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
ノックアウト効率を向上させるための、CKMゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
トランスフェクションによる導入に対応
設計バリエーション
CRISPRs +/- HDR
- creatine kinase-M CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびcreatine kinase-M CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CKM遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
creatine kinase-M HDRプラスミド（h）および creatine kinase-M HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCKMホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCKM標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。