CRABP-I Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419790

Visão geral

Crabp1 codifica a proteína 1 de ligação ao ácido retinoico celular (CRABP-I), um transportador intracelular de alta afinidade que atua como tampão e realiza o tráfego do ácido retinoico all-trans, moldando a disponibilidade de retinoides no citosol e no núcleo. Ao modular a distribuição e o metabolismo do ácido retinoico, a CRABP-I influencia programas transcricionais dependentes de AR que controlam decisões de destino celular, diferenciação e padronização tecidual. Em sistemas murinos, Crabp1 é utilizado para investigar dinâmicas de sinalização de retinoides específicas do contexto, distintas da ativação canônica de RAR/RXR, incluindo interações com o catabolismo do AR e a responsividade celular a sinais derivados da vitamina A. Alterações no processamento de retinoides são amplamente relevantes para fenótipos do desenvolvimento e para a desregulação, associada a doenças, da diferenciação e da homeostase, tornando Crabp1 um nó útil para estudos de perturbação em nível de via.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO CRABP-I (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Crabp1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Crabp1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Crabp1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína CRABP-I.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Crabp1 para a investigação da sinalização de CRABP-I, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Crabp1 críticos para a função CRABP-I
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Crabp1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo CRABP-I Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo CRABP-I Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Crabp1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo CRABP-I Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR CRABP-I (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Crabp1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Crabp1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.