CPTI-M Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-401456-NIC

CPT1B codifica a carnitina palmitoiltransferase 1B (CPTI-M), a enzima da membrana mitocondrial externa associada ao músculo que catalisa a etapa limitante da taxa na formação de acilcarnitinas de cadeia longa para importação para a mitocôndria e subsequente β-oxidação. Ao controlar a entrada de ácidos gordos na matriz mitocondrial, a CPTI-M ajuda a regular o catabolismo lipídico, a homeostase energética e a alternância de substratos entre ácidos gordos e glicose, integrando-se com a sinalização por AMPK, com programas de transcrição metabólica mediados por PPAR e com o controlo do fluxo de ácidos gordos mediado por malonil-CoA. Alterações na atividade ou na expressão de CPT1B têm sido associadas a desregulação da oxidação de ácidos gordos, stress lipotóxico e remodelação metabólica relevante para fenótipos cardiometabólicos e para a energética muscular. Em contextos de investigação, CPT1B é frequentemente estudado no âmbito da função mitocondrial, do perfil de acilcarnitinas, da capacidade oxidativa e da adaptação metabólica à disponibilidade de nutrientes.

CPTI-M O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus CPT1B em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de CPT1B. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função CPT1B. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com CPT1B interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.