CPS2 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-403519-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- CPS2O plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase CPS2 (h) e o Plasmídeo Double Nickase CPS2 (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para CAD. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:CPS2 Anticorpo (F-6): sc-376072
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
CPS2 Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-403519-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CPS2 Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-403519-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
O CAD humano codifica uma enzima citosólica multifuncional que catalisa as três primeiras reações comprometidas da biossíntese de novo de pirimidinas, com o domínio CPS2 mediando a síntese de fosfato de carbamoíla dependente de glutamina. Ao acoplar a atividade de carbamoil-fosfato sintetase às funções de aspartato transcarbamilase e diidroorotase numa única cadeia polipeptídica, o CAD sustenta a produção de nucleótidos necessária para a replicação do DNA, a transcrição de RNA e a síntese de fosfolípidos de membrana. A atividade do CAD é coordenada com sinais proliferativos e com o estado metabólico celular, ligando a disponibilidade de pirimidinas à progressão do ciclo celular e às respostas ao stresse. A desregulação do metabolismo de pirimidinas e alterações na função do CAD têm sido associadas a fenótipos proliferativos e a vulnerabilidades metabólicas em modelos relevantes para o cancro, tornando o CAD um nó útil para estudar a homeostase de nucleótidos.
CPS2 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus CAD em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de CAD. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função CAD. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com CAD interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.