CPS2 Plasmide Double Nickase (h): sc-403519-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CPS2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CPS2 Double Nickase Plasmid (h) e il CPS2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CAD. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CPS2 Antibody (F-6): sc-376072
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CPS2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-403519-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CPS2 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403519-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene umano **CAD** codifica un enzima citosolico multifunzionale che catalizza le prime tre reazioni irreversibili della biosintesi *de novo* delle pirimidine, con il dominio **CPS2** che media la sintesi di carbamoil-fosfato dipendente dalla glutammina. Accoppiando l’attività della carbamoil-fosfato sintetasi alle funzioni di aspartato transcarbamilasi e diidroorotasi all’interno di un’unica proteina, CAD sostiene la produzione di nucleotidi necessaria per la replicazione del DNA, la trascrizione dell’RNA e la sintesi dei fosfolipidi di membrana. L’attività di CAD è coordinata con i segnali proliferativi e con lo stato metabolico della cellula, collegando la disponibilità di pirimidine alla progressione del ciclo cellulare e alle risposte allo stress. La disregolazione del metabolismo delle pirimidine e alterazioni della funzione di CAD sono state associate a fenotipi proliferativi e a vulnerabilità metaboliche in modelli rilevanti per il cancro, rendendo CAD un nodo utile per lo studio dell’omeostasi dei nucleotidi.
CPS2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CAD nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CAD. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CAD. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CAD interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.