COPG CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-404407

概要

COPG1は、コートマー（coatomer）タンパク質複合体I（COPI）のガンマサブユニットをコードしています。COPIは細胞質側のコート複合体で、ゴルジ体から小胞体への逆行性輸送およびゴルジ槽内での輸送において、小胞の出芽とカーゴ選別を仲介します。COPGは他のCOPIサブユニットとともにコートの組み立てに関与し、膜輸送、ゴルジ体の構造維持、ならびにソーティングシグナルを介した小胞体常在タンパク質の回収を調節することで、タンパク質成熟と分泌経路の恒常性を支えます。COPI依存的な輸送が障害されると、小胞体ストレス応答、糖鎖付加、プロテオスタシスが乱れ得るため、COPG1の機能は細胞増殖・分化・ストレス適応に関わる経路と関連づけられます。分泌および輸送プログラムの変化は、増殖性疾患や免疫関連疾患の病態でしばしば利用されることから、COPG1は膜輸送とオルガネラ動態の機構研究における有用な解析ノードとなります。

COPG CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCOPG1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、COPG1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、COPG1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、COPGタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、COPGシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、COPG1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• COPGの機能に不可欠なCOPG1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、COPG1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• COPG CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびCOPG CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、COPG1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  COPG HDRプラスミド（h）および COPG HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCOPG1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCOPG1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。