connexin 43 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400241-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- connexin 43 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- connexin 43ダブルニカースプラスミド（h）およびconnexin 43ダブルニカースプラスミド（h2）は、GJA1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: connexin 43 抗体 (F-7): sc-271837
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
connexin 43 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-400241-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
connexin 43 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-400241-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ヒトのGJA1は、主要なギャップ結合タンパク質であるコネキシン43（Cx43）をコードしている。Cx43は六量体のコネクソンとして集合し、細胞間チャネルを形成することで、イオンや小分子代謝産物の直接的な交換を可能にする。ギャップ結合を介した細胞間コミュニケーションを通じて、Cx43は電気的結合、カルシウムシグナル伝達、組織恒常性、ならびにストレスに対する協調的応答を制御し、心臓の興奮伝導、創傷治癒、発生過程におけるパターニングで重要な役割を担う。コネキシン43はリン酸化依存的な輸送と分解回転によって動的に制御されており、PKC、MAPK/ERK、細胞骨格リモデリングに関わる経路と結び付いている。GJA1の発現変化やチャネル機能の異常は、不整脈誘発性の表現型、組織修復不全、さらにがんに関連する細胞間コミュニケーションや浸潤性の変化と関連していることが報告されている。
connexin 43 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における GJA1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、GJA1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、GJA1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、GJA1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。