COL8A2 Double Nickase Plasmid (h): sc-403831-NIC

COL8A2 kodiert die α2‑Kette des Typ‑VIII‑Kollagens, eines kurzkettigen, nicht fibrillären Kollagens, das zu spezialisierten Assemblierungen der Basalmembran und der extrazellulären Matrix (ECM) beiträgt. Es wird besonders stark in okulären Geweben exprimiert, wo es die Struktur des Hornhautendothels und der Descemet‑Membran unterstützt und Zell‑Matrix‑Interaktionen moduliert, die Adhäsion, Migration und Differenzierung beeinflussen. Die mit COL8A2 verknüpfte ECM‑Remodellierung überschneidet sich mit integrinvermittelter Signalübertragung, der Dynamik fokaler Adhäsionen und TGF‑β‑responsiven Matrixprogrammen, die Gewebebiomechanik und zelluläre Stressantworten prägen. Genetische Variation und eine dysregulierte Expression von COL8A2 sind mit kornealen Endotheldystrophien assoziiert, was COL8A2 zu einem relevanten Ziel für die Untersuchung von ECM‑Homöostase, Proteostase und der Endothelzellbiologie in humanen Modellen macht.

COL8A2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des COL8A2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von COL8A2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die COL8A2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit COL8A2-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.