COL8A2 Plasmide Double Nickase (h): sc-403831-NIC

COL8A2 codifica la catena α2 del collagene di tipo VIII, un collagene non fibrillare a catena corta che contribuisce ad assemblaggi specializzati della membrana basale e della matrice extracellulare (ECM). È espresso in modo marcato nei tessuti oculari, dove sostiene la struttura dell’endotelio corneale e della membrana di Descemet e modula le interazioni cellula–matrice che influenzano adesione, migrazione e differenziazione. Il rimodellamento dell’ECM legato a COL8A2 si interseca con la segnalazione mediata dalle integrine, con la dinamica delle adesioni focali e con programmi della matrice responsivi al TGF-β che plasmano la biomeccanica tissutale e le risposte cellulari allo stress. Le varianti genetiche e l’espressione deregolata di COL8A2 sono associate a distrofie endoteliali corneali, rendendolo un bersaglio rilevante per studiare l’omeostasi dell’ECM, la proteostasi e la biologia delle cellule endoteliali in modelli umani.

COL8A2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus COL8A2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di COL8A2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di COL8A2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con COL8A2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.