Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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COL5A1 Double Nickase Plasmid (h): sc-401579-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das COL5A1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- COL5A1 Double-Nickase-Plasmid (h) und COL5A1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf COL5A1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: COL5A1: sc-166155
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
COL5A1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401579-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
COL5A1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401579-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
COL5A1 kodiert die Alpha-1-Kette von Kollagen Typ V, einem mengenmäßig untergeordneten, aber funktionell entscheidenden fibrillären Kollagen, das die Kollagenfibrillogenese reguliert und den Durchmesser sowie die Organisation von Typ-I/V-Kollagenfasern in der extrazellulären Matrix kontrolliert. Über seine Rolle beim Aufbau der Matrix beeinflusst COL5A1 die Zell–Matrix-Signalübertragung, die Zugfestigkeit von Geweben und Umbauprozesse, die mit integrinvermittelter Adhäsion und Signalwegen zusammenhängen, welche das Verhalten von Fibroblasten steuern. Eine veränderte Funktion oder Expression von COL5A1 ist mit erblichen Bindegewebserkrankungen assoziiert, darunter das klassische Ehlers-Danlos-Syndrom, und wird häufig im Zusammenhang mit der Mechanik von Haut und Sehnen, der Gefäßintegrität und einer Fehlregulation der Matrix untersucht. Als struktureller Determinant der ECM ist es zudem relevant, um zu untersuchen, wie die Kollagenarchitektur Entwicklung, Wundheilung und stromale Beiträge zu Krankheitsphänotypen moduliert.
COL5A1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des COL5A1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von COL5A1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die COL5A1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit COL5A1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.