COL5A1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-401579-NIC

COL5A1はV型コラーゲンのα1鎖をコードしています。V型コラーゲンは量的には少ないものの機能的に重要な線維性コラーゲンで、コラーゲン線維形成（フィブリル形成）を調節し、細胞外マトリックス（ECM）におけるI型／V型コラーゲン線維の直径や配列・組織化を制御します。マトリックスの組み立てに関与することで、COL5A1は細胞—マトリックス間シグナル伝達、組織の引張強度、ならびにインテグリン介在性接着や線維芽細胞の挙動を制御する経路と交差するリモデリング過程に影響を与えます。COL5A1の機能や発現の変化は、古典型エーラス・ダンロス症候群を含む遺伝性結合組織疾患と関連しており、皮膚や腱の力学特性、血管の健全性、マトリックスの調節異常といった文脈で頻繁に研究されています。ECMの構造的決定因子として、コラーゲンのアーキテクチャが発生、創傷修復、さらには疾患表現型に対する間質（ストローマ）の寄与をどのように調節するかを検討する上でも重要です。

COL5A1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における COL5A1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、COL5A1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、COL5A1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、COL5A1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。