COL4A3 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-419745-ACT

マウス Col4a3 は、IV型コラーゲン（COL4A3）のα3鎖をコードしており、基底膜の中核的な構造要素として、α3α4α5(IV)のヘテロ三量体ネットワークを形成します。この細胞外マトリックスの足場は、糸球体および尿細管の基底膜の完全性を支えるとともに、細胞—マトリックス接着やメカノトランスダクションに影響し、ラミニン、インテグリン、マトリックス改変酵素との相互作用を通じて組織構築を規定します。COL4A3 は、腎の濾過バリア機能に重要な基底膜の組織化および細胞外マトリックス恒常性の経路と密接に関連しています。Col4a3 の機能異常や遺伝学的破綻は、進行性の腎病変とそれに伴う組織リモデリング表現型を示す遺伝性基底膜疾患のモデルとして、in vivo およびオルガノイド系で広く用いられています。

COL4A3 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Col4a3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

COL4A3 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Col4a3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCol4a3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性COL4A3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCol4a3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCOL4A3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCol4a3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCOL4A3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。