COL4A2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401462-ACT

COL4A2は、IV型コラーゲンのα2鎖をコードしており、基底膜の中核をなす構造要素として、組織の骨格や濾過バリアを支えるコラーゲンIVネットワークを形成します。細胞外マトリックス（ECM）の構築や細胞—マトリックス接着を制御することで、COL4A2は血管の恒常性、上皮の極性、発生過程の形態形成に影響し、インテグリン／FAKシグナル伝達、ECMリモデリング、TGF-βにより制御されるマトリックス恒常性といった経路とも関わります。コラーゲンIVの組成が乱れると、基底膜の力学特性や透過性が変化し、微小血管機能障害や臓器特異的な病態の一因となり得ます。ヒトにおけるCOL4A2の変異や発現調節異常は、脳血管疾患や小血管障害、眼の表現型、腎基底膜の異常と関連づけられており、ECM駆動性の疾患メカニズムを研究する上で重要な標的です。

COL4A2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性COL4A2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

COL4A2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における COL4A2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCOL4A2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性COL4A2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCOL4A2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCOL4A2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCOL4A2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCOL4A2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。