COL2A1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400359-NIC

COL2A1は、硝子軟骨および発生中の脊椎骨格に存在する主要な線維性コラーゲンであるII型コラーゲンのα1鎖をコードする。その細胞外マトリックスの構築は、軟骨細胞の分化、組織の生体力学的特性、そしてコラーゲン線維形成を支え、プロテオグリカンに富むネットワークと統合されることで軟骨の恒常性を維持している。COL2A1の発現と成熟過程は、SOX9により駆動される軟骨形成プログラムによる制御や、TGF-βファミリーのシグナル伝達からのフィードバックなどを含むマトリックス再構築経路と交差している。遺伝的多型やCOL2A1機能の破綻は、遺伝性骨格異形成や、変形性関節症に関連する軟骨変性と関連しており、運動器研究および細胞外マトリックス生物学の分野で一般的な研究対象となっている。

COL2A1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における COL2A1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、COL2A1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、COL2A1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、COL2A1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。