Plásmido Doble Nickase (h) COL2A1: sc-400359-NIC

COL2A1 codifica la cadena α1 del colágeno tipo II, un colágeno fibrilar principal del cartílago hialino y de la columna vertebral en desarrollo. Su ensamblaje en la matriz extracelular sustenta la diferenciación de los condrocitos, la biomecánica del tejido y la fibrilogénesis del colágeno, integrándose con redes ricas en proteoglucanos para mantener la integridad del cartílago. La expresión y el procesamiento de COL2A1 se interrelacionan con vías de remodelación de la matriz, incluida la regulación por programas condrogénicos impulsados por SOX9 y la retroalimentación de la señalización de la familia TGF-β. La variación genética o la función desregulada de COL2A1 se asocia con displasias esqueléticas hereditarias y con la degeneración del cartílago relevante para la osteoartritis, lo que lo convierte en un blanco frecuente en la investigación de biología musculoesquelética y de la matriz extracelular.

COL2A1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus COL2A1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de COL2A1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de COL2A1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con COL2A1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.