COL15A1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404027

Panoramica

COL15A1 codifica la catena alfa 1 del collagene di tipo XV, un collagene non fibrillare localizzato nella membrana basale e nella matrice extracellulare pericellulare, dove sostiene l’architettura tissutale e la comunicazione cellula–matrice. Contribuendo all’assemblaggio e al rimodellamento della matrice extracellulare, COL15A1 influenza programmi di adesione, migrazione e meccanotrasduzione che intersecano la segnalazione integrina/FAK e la disponibilità di fattori di crescita regolata dalla matrice. Un’espressione alterata di COL15A1 è associata a cambiamenti nell’organizzazione dello stroma, nel comportamento della nicchia angiogenica e in fenotipi invasivi osservati in molteplici contesti patologici, inclusi la biologia del cancro e le patologie associate al sistema vascolare. In quanto componente della matrice extracellulare, COL15A1 è spesso studiato per il suo ruolo nella regolazione, mediata dal microambiente, del comportamento delle cellule epiteliali ed endoteliali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO COL15A1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene COL15A1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del COL15A1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto COL15A1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina COL15A1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di COL15A1 per lo studio della segnalazione di COL15A1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni COL15A1 critici per la funzione di COL15A1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di COL15A1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal COL15A1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal COL15A1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus COL15A1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal COL15A1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR COL15A1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia COL15A1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio COL15A1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.