COL15A1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-404027

Übersicht

COL15A1 kodiert die Alpha-1-Kette von Kollagen Typ XV, ein nicht-fibrilläres Kollagen, das in der Basalmembran und der perizellulären extrazellulären Matrix lokalisiert ist, wo es die Gewebearchitektur und die Zell–Matrix-Kommunikation unterstützt. Durch seinen Beitrag zum Aufbau und Umbau der extrazellulären Matrix beeinflusst COL15A1 Programme der Adhäsion, Migration und Mechanotransduktion, die sich mit der Integrin-/FAK-Signalgebung und der durch die Matrix regulierten Verfügbarkeit von Wachstumsfaktoren überschneiden. Eine veränderte COL15A1-Expression ist mit Änderungen in der stromalen Organisation, dem Verhalten angiogener Nischen und invasiven Phänotypen verbunden, die in verschiedenen Krankheitskontexten beobachtet werden, einschließlich der Krebsbiologie und gefäßassoziierter Pathologien. Als Bestandteil der extrazellulären Matrix wird COL15A1 häufig im Hinblick auf seine Rolle bei der mikroumgebungsabhängigen Regulation des Verhaltens epithelialer und endothelialer Zellen untersucht.

Das COL15A1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des COL15A1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des COL15A1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von COL15A1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die COL15A1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von COL15A1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der COL15A1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf COL15A1-Exone abzielen, die für die COL15A1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere COL15A1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom COL15A1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom COL15A1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des COL15A1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das COL15A1 HDR-Plasmid (h) und COL15A1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von COL15A1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten COL15A1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.