COL13A1 Double Nickase Plasmid (h): sc-405731-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das COL13A1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- COL13A1 Double-Nickase-Plasmid (h) und COL13A1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf COL13A1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
COL13A1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-405731-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
COL13A1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-405731-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
COL13A1 kodiert die Kollagen-Typ-XIII-α1-Kette, ein transmembranes Kollagen, das an der Zelloberfläche lokalisiert ist und zur Organisation der extrazellulären Matrix sowie zu stabiler Zell–Matrix-Adhäsion beiträgt. Es unterstützt basement-membran-assoziierte Strukturen und steht in Verbindung mit integrin-gekoppelter Signalübertragung, die die Organisation des Zytoskeletts, die Mechanotransduktion und die Gewebeintegrität beeinflusst. Die Funktion von COL13A1 ist an Prozessen wie der Reifung der neuromuskulären Endplatte, epithelial–mesenchymalen Interaktionen und der wundassoziierten Matrixumgestaltung beteiligt. Eine Fehlregulation der COL13A1-Expression oder der Matrixverankerung kann für Studien zur Bindegewebsbiologie, zu fibroseähnlichem Remodeling und zu mikroumgebungsbedingten Signalen relevant sein, die das Zellverhalten in Entwicklungs- und Krankheitsmodellen prägen.
COL13A1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des COL13A1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von COL13A1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die COL13A1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit COL13A1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.