COL12A1 Lentiviral Activation Particles (h): sc-402361-LAC

COL12A1 kodiert die Kollagen-Typ-XII-Alpha-1-Kette, ein fibrillenassoziiertes Kollagen mit unterbrochenen Tripelhelices (FACIT), das in der extrazellulären Matrix lokalisiert ist und die Kollagenfibrillogenese, die Zugfestigkeit von Geweben sowie die Mechanotransduktion reguliert. Durch die Organisation kollagen-I-reicher Fibrillen und die Interaktion mit Proteoglykanen und Zelloberflächenrezeptoren trägt COL12A1 zum Matrix-Remodeling sowie zu Programmen der Zelladhäsion und -migration bei, die Entwicklung und die muskuloskelettale Homöostase beeinflussen. Eine veränderte Expression oder Funktion von COL12A1 wurde mit erblichen Bindegewebsphänotypen und einer Dysregulation der extrazellulären Matrix in Verbindung gebracht, was es für Studien zur Sehnen-/Bandbiologie, Fibrose und matrixgetriebener Signalübertragung relevant macht. Diese Funktionen machen COL12A1 zu einem nützlichen Knotenpunkt, um zu untersuchen, wie die Architektur der EZM das Zellverhalten und Stressantworten prägt.

COL12A1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente COL12A1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

COL12A1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der COL12A1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen COL12A1-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen COL12A1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.