coilin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400927-ACT

O gene humano **COIL** codifica a coilina, uma proteína estrutural característica dos corpos de Cajal que coordena a montagem e a maturação de ribonucleoproteínas nucleares pequenas (snRNPs) e ribonucleoproteínas nucleolares pequenas (snoRNPs), dando suporte ao splicing do pré-mRNA e ao processamento de RNA. A coilina interage com componentes do spliceossomo e orienta o tráfego de complexos RNA-proteína entre subdomínios nucleares, conectando a arquitetura nuclear à regulação da expressão gênica. Por meio dessas funções, **COIL** contribui para vias que governam o metabolismo de RNA, a biogênese de ribossomos e a organização nuclear acoplada ao ciclo celular. Alterações na localização da coilina ou na integridade dos corpos de Cajal foram observadas em contextos de estresse celular e transformação maligna, tornando **COIL** um alvo útil para estudos mecanísticos de corpos nucleares e da regulação do transcriptoma.

coilin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de COIL sem alterar a sequência de ADN subjacente.

coilin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus COIL em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição COIL, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de coilin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus COIL nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de coilin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via coilin em células tumorais com expressão de COIL silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.