Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Cofilin 1 Double Nickase Plasmid (h): sc-400394-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Cofilin 1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Cofilin 1 Double-Nickase-Plasmid (h) und Cofilin 1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CFL1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Cofilin 1: sc-53934
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Cofilin 1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400394-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Cofilin 1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400394-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CFL1 kodiert das menschliche Cofilin‑1, ein zentrales aktinbindendes Protein, das das Durchtrennen und die Depolymerisation von Aktinfilamenten beschleunigt und so einen schnellen Aktin-Umsatz aufrechterhält. Indem es den Umbau des Zytoskeletts mit upstream-Signalen von GTPasen der Rho-Familie und Kinasen wie LIMK und TESK koppelt, trägt Cofilin‑1 zur Koordination der Lamellipodien-Dynamik, der Endozytose, der Zytokinese und der Zellpolarität bei. Die Aktivität von CFL1 wird streng über den Phosphorylierungszustand und Wechselwirkungen mit Phosphoinositiden reguliert, wodurch die Aktin-Reorganisation mit Signalübertragung und Membrantransport verknüpft wird. Eine fehlregulierte Aktin-Dynamik unter Beteiligung von CFL1 wurde in der Literatur mit veränderten Phänotypen der Zellmigration und -invasion sowie mit neuronalen und Stressantwort-Prozessen in Verbindung gebracht, die für mehrere Krankheitsforschungsgebiete relevant sind.
Cofilin 1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CFL1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CFL1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CFL1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CFL1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.