Cofilin 1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400394-ACT

CFL1 codifica a cofilina 1, um regulador central da renovação (turnover) dos filamentos de actina que se liga à F-actina e promove o seccionamento e a despolimerização, sustentando uma remodelação rápida do citoesqueleto. A sua atividade é rigidamente controlada por sinalização dependente de fosforilação e por vias a montante como Rho GTPase–LIMK–SSH, coordenando a formação de lamelipódios, a polaridade celular, a citocinese e a endocitose. Ao moldar a dinâmica da actina, a cofilina 1 influencia a migração celular, a adesão e a mecanotransdução, processos frequentemente perturbados na invasão e metástase do cancro, bem como em contextos cardiovasculares e inflamatórios. A desregulação da sinalização da cofilina e da remodelação da actina também tem sido associada a fenótipos neurodegenerativos, incluindo agregados anómalos de actina–cofilina descritos em modelos de disfunção sináptica.

Cofilin 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CFL1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Cofilin 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CFL1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CFL1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Cofilin 1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CFL1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Cofilin 1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Cofilin 1 em células tumorais com expressão de CFL1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.