Cofilin 1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400394-ACT

CFL1 kodiert Cofilin‑1, einen zentralen Regulator des Umsatzes von Aktinfilamenten, der an F‑Aktin bindet und das Durchtrennen sowie die Depolymerisation fördert, um einen schnellen Umbau des Zytoskeletts zu ermöglichen. Seine Aktivität wird streng durch phosphorylierungsabhängige Signalgebung und übergeordnete Signalwege wie Rho‑GTPase–LIMK–SSH kontrolliert und koordiniert so die Bildung von Lamellipodien, Zellpolarität, Zytokinese und Endozytose. Durch die Steuerung der Aktindynamik beeinflusst Cofilin‑1 Zellmigration, Adhäsion und Mechanotransduktion – Prozesse, die bei Krebsinvasion und Metastasierung sowie in kardiovaskulären und entzündlichen Kontexten häufig gestört sind. Eine fehlregulierte Cofilin‑Signalgebung und Aktin‑Remodellierung wurde zudem mit neurodegenerativen Phänotypen in Verbindung gebracht, darunter abnorme Aktin‑Cofilin‑Aggregate, die in Modellen synaptischer Dysfunktion beschrieben wurden.

Cofilin 1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CFL1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Cofilin 1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CFL1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CFL1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Cofilin 1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CFL1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Cofilin 1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Cofilin 1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CFL1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.