CNOT6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406273

概要

CNOT6（CCR4-NOT転写複合体サブユニット6）は、CCR4–NOT複合体に含まれる触媒活性を持つデアデニラーゼであり、mRNAのpoly(A)テールを短縮して転写産物の分解開始を促し、翻訳を微調整します。mRNAの安定性を制御することで、CNOT6は細胞周期の進行、ストレス応答、分化、自然免疫シグナル伝達を司る経路にわたる転写後の遺伝子制御に寄与します。その活性はmiRNA介在性サイレンシングや、より広範なRNA品質管理ネットワークとも連携し、細胞からのシグナルに応じたトランスクリプトーム動態を形作ります。CNOT6の機能や発現の変化を含むCCR4–NOT依存的デアデニル化の破綻は、がん生物学や免疫関連の表現型に関わる異常な遺伝子発現プログラムとの関連が報告されています。

CNOT6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCNOT6遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CNOT6内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CNOT6のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CNOT6タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CNOT6シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CNOT6欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CNOT6の機能に不可欠なCNOT6エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CNOT6ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CNOT6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびCNOT6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CNOT6遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CNOT6 HDRプラスミド（h）および CNOT6 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCNOT6ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCNOT6標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。