CMTM4 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-405296-NIC

CMTM4 (proteína 4 contendo domínio transmembranar MARVEL semelhante a CKLF) é uma proteína de membrana multipasse que se localiza em compartimentos endossomais e na membrana plasmática e contribui para a organização de membranas e o tráfego vesicular. Por meio do seu domínio MARVEL, a CMTM4 tem sido associada à regulação da renovação (turnover) e da estabilidade de receptores, incluindo a modulação da sinalização de checkpoint imune por efeitos sobre a expressão de PD-L1 na superfície celular. Essas atividades colocam a CMTM4 na interface entre endocitose, dinâmica de membranas e vias de sinalização relacionadas ao sistema imune que influenciam interações célula–célula. A expressão ou função desregulada de CMTM4 tem sido estudada no contexto de evasão imune tumoral e de fenótipos imunorregulatórios mais amplos, tornando-a relevante para estudos mecanísticos em modelos de oncologia e imunologia.

CMTM4 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus CMTM4 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de CMTM4. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função CMTM4. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com CMTM4 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.