CLPTM1 Plasmide Double Nickase (m): sc-425178-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CLPTM1 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CLPTM1 Double Nickase Plasmid (m) e il CLPTM1 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Clptm1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CLPTM1 Antibody (G-7): sc-374619
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CLPTM1 Plasmide Double Nickase (m) | sc-425178-NIC | 20 µg | $410.00 |
Clptm1 codifica CLPTM1, una proteina transmembrana multipasso localizzata prevalentemente su membrane intracellulari, incluso il reticolo endoplasmatico, dove si ritiene contribuisca al traffico delle proteine di membrana e alle risposte cellulari allo stress. Nel topo e in altri sistemi mammiferi, CLPTM1 è stata collegata alla regolazione dell’espressione in superficie di recettori e canali ionici, implicandola in processi quali la segnalazione sinaptica e l’adattamento cellulare alle sfide della proteostasi. Un’alterata espressione di CLPTM1 è stata associata a fenotipi correlati al cancro e a vie di risposta ai farmaci in diversi contesti sperimentali, a supporto dell’indagine sui suoi ruoli nella segnalazione di sopravvivenza e nella sensibilità cellulare agli stressori. Gli studi funzionali si concentrano spesso su come CLPTM1 influenzi l’organizzazione delle membrane, il trasporto e le reti di segnalazione a valle rilevanti per la biologia neurologica e oncogenica.
CLPTM1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Clptm1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Clptm1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Clptm1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Clptm1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.