Plásmido Doble Nickase (m) CLIP-170: sc-425158-NIC

Mouse Clip1 codifica CLIP-170, una proteína que sigue el extremo plus de los microtúbulos, se une a proteínas “end-binding” y conecta microtúbulos dinámicos con factores corticales y asociados a orgánulos. CLIP-170 regula la polimerización de microtúbulos, la captura por el cinetocoro y el tráfico vesicular dependiente de microtúbulos, influyendo en la polaridad celular, la migración y la progresión mitótica. Mediante la coordinación de la remodelación del citoesqueleto y el transporte intracelular, CLIP-170 ayuda a configurar salidas de señalización que dependen de la organización espacial, incluidas vías que controlan la adhesión y la fidelidad del punto de control del huso. La desregulación de la dinámica de los microtúbulos y de los procesos asociados al tráfico es ampliamente relevante para fenotipos proliferativos y del neurodesarrollo, lo que convierte a Clip1 en una diana útil para estudios mecanísticos del control del citoesqueleto.

CLIP-170 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Clip1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Clip1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Clip1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Clip1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.