CLC-6 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405938

Visão geral

CLCN6 codifica o trocador intracelular de cloreto/próton CLC-6, um membro da família CLC que se localiza predominantemente nas membranas de endossomos e lisossomos, onde contribui para a homeostase iônica vesicular. Ao acoplar o transporte de cloreto a gradientes de prótons, o CLC-6 está implicado na regulação da maturação de endossomos, da acidificação lisossomal e de processos de tráfego de membranas que influenciam a triagem e a renovação de proteínas. A disrupção dessas vias pode alterar a fisiologia de neurônios e de células epiteliais, e variações genéticas em CLCN6 têm sido associadas a fenótipos do neurodesenvolvimento e a disfunção mais ampla relacionada a lisossomos em estudos humanos. Assim, o CLCN6 é comumente investigado no contexto da biologia endolisossomal, da reciclagem de carga e de respostas ao estresse celular ligadas a alterações no pH e no equilíbrio iônico das organelas.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO CLC-6 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene CLCN6 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do CLCN6, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do CLCN6 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína CLC-6.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de CLCN6 para a investigação da sinalização de CLC-6, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) CLCN6 críticos para a função CLC-6
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos CLCN6 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo CLC-6 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo CLC-6 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus CLCN6. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo CLC-6 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR CLC-6 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia CLCN6 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo CLCN6 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.