CLC-6 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405938

Panoramica

CLCN6 codifica lo scambiatore intracellulare cloruro/protoni CLC-6, un membro della famiglia CLC che si localizza prevalentemente sulle membrane endosomiali e lisosomiali, dove contribuisce all’omeostasi ionica delle vescicole. Accoppiando il trasporto di cloruro ai gradienti di protoni, CLC-6 è implicato nella regolazione della maturazione degli endosomi, dell’acidificazione lisosomiale e dei processi di traffico di membrana che influenzano lo smistamento e il turnover delle proteine. L’alterazione di queste vie può modificare la fisiologia delle cellule neuronali ed epiteliali, e variazioni genetiche in CLCN6 sono state associate, negli studi sull’uomo, a fenotipi del neurosviluppo e a disfunzioni più ampie legate ai lisosomi. Di conseguenza, CLCN6 viene comunemente studiato nel contesto della biologia endolisosomiale, del riciclo dei carichi e delle risposte allo stress cellulare connesse ad alterazioni del pH degli organelli e dell’equilibrio ionico.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CLC-6 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CLCN6 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CLCN6 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CLCN6 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CLC-6.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CLCN6 per lo studio della segnalazione di CLC-6, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CLCN6 critici per la funzione di CLC-6
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CLCN6 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CLC-6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal CLC-6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CLCN6. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CLC-6 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR CLC-6 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CLCN6 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CLCN6 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.