CHSY3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-429749

概要

Chsy3はコンドロイチン硫酸合成酵素3（CHSY3）をコードしており、CHSY3はゴルジ体に局在する糖転移酵素として、プロテオグリカン上のコンドロイチン硫酸グリコサミノグリカン鎖の伸長に関与する。CHSY3は他のコンドロイチン重合酵素や硫酸転移酵素と協調することで、細胞外マトリックスの構築、増殖因子の隔離、ならびに組織の形態形成と恒常性を規定する細胞―マトリックス間シグナル伝達に影響を与える。マウスの系では、コンドロイチン硫酸の組成変化が、プロテオグリカン依存的経路を調節することにより、軟骨・骨格の発生、神経可塑性、炎症性微小環境に影響し得る。そのためChsy3は、筋骨格系および神経生物学的表現型のモデルにおける、細胞外マトリックスのリモデリングやプロテオグリカン生物学の機構研究に関連する。

CHSY3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるChsy3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Chsy3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Chsy3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CHSY3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CHSY3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Chsy3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CHSY3の機能に不可欠なChsy3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Chsy3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CHSY3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびCHSY3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Chsy3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CHSY3 HDRプラスミド（m）および CHSY3 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはChsy3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のChsy3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。