CHSY1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-405999-ACT

CHSY1 (Chondroitinsulfat-Synthase 1) kodiert eine im Golgi-Apparat lokalisierte Glykosyltransferase, die die Polymerisierung von Chondroitinsulfat-Ketten auf Proteoglykan-Kernproteinen katalysiert. Durch die Förderung der Glykosaminoglykan-Biosynthese prägt CHSY1 die Zusammensetzung der extrazellulären Matrix und moduliert Zelladhäsion, Migration und die Präsentation von Wachstumsfaktoren, mit nachgeschalteten Effekten auf die Entwicklungssteuerung und die Gewebehomöostase. Eine veränderte Chondroitinsulfat-Zusammensetzung wird mit fehlregulierter Morphogen-Signalgebung und Matrix-Remodelling in Verbindung gebracht, und Varianten in CHSY1 wurden mit angeborenen Skelett- und Gliedmaßenphänotypen sowie mit Kontexten aberranter Proliferation assoziiert. Diese biologischen Eigenschaften machen CHSY1 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung proteoglykanvermittelter Signalwege und einer von der extrazellulären Matrix abhängigen Regulation des Zellverhaltens.

CHSY1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CHSY1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CHSY1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CHSY1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CHSY1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CHSY1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CHSY1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CHSY1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CHSY1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CHSY1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.