ChREBP Double Nickaseプラスミド (m): sc-425525-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- ChREBP Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- ChREBPダブルニカースプラスミド（m）およびChREBPダブルニカースプラスミド（m2）は、Mlxiplを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
ChREBP Double Nickaseプラスミド (m) | sc-425525-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ChREBP Double Nickaseプラスミド (m2) | sc-425525-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Mlxiplは、糖応答性転写因子である炭水化物応答エレメント結合タンパク質（ChREBP）をコードしている。ChREBPは解糖系およびde novo脂肪新生関連遺伝子の発現を誘導することで、過剰な炭水化物を脂質へ変換する過程を統合的に制御する。肝臓や脂肪組織などのマウス組織では、ChREBPはグルコース代謝とインスリンシグナルの下流で、炭水化物フラックスを代謝遺伝子プログラムと結び付け、トリグリセリド合成、肝細胞の代謝的ゾーニング、脂肪細胞機能を形作る。ChREBP活性の破綻は、肝脂肪化、インスリン抵抗性、脂質取り扱いの異常などの代謝表現型と関連しており、Mlxiplは栄養状態に駆動される転写制御を研究するうえで重要な結節点となる。さらに転写制御因子としてのChREBPは、炭水化物代謝、脂肪新生、酸化ストレス応答のクロストークを検討するための扱いやすい入口にもなる。
ChREBP ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Mlxipl 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Mlxipl内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Mlxiplの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Mlxiplが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。