ChREBP Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-401803-NIC

MLXIPL codifica a proteína de ligação a elementos de resposta a carboidratos (ChREBP), um fator de transcrição responsivo à glicose que conecta a disponibilidade de carboidratos à expressão de genes lipogênicos e glicolíticos. Em resposta à sinalização metabólica, a ChREBP coopera com cofatores como a MLX para regular promotores que contêm elementos de resposta a carboidratos, integrando a detecção de nutrientes ao controle transcricional do metabolismo hepático e adiposo. Esse eixo regulatório contribui para vias que governam a lipogênese de novo, a síntese de triglicerídeos e a homeostase da glicose, vinculando a atividade da ChREBP ao remodelamento metabólico em condições de excesso de nutrientes. A sinalização MLXIPL/ChREBP desregulada tem sido associada à resistência à insulina, a fenótipos de fígado gorduroso e a mecanismos mais amplos de doenças cardiometabólicas, tornando-a um nó relevante para o estudo de redes gênicas metabólicas.

ChREBP O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus MLXIPL em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de MLXIPL. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função MLXIPL. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com MLXIPL interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.