CHPT1 CRISPR Activationプラスミド (h2): sc-412745-ACT-2

ヒトCHPT1（choline phosphotransferase 1）は、小胞体に局在する酵素をコードしており、CDP-コリンからホスホコリンをジアシルグリセロールへ転移することで、ケネディ経路におけるホスファチジルコリン生合成の最終段階を触媒する。細胞内のホスファチジルコリン産生を制御することにより、CHPT1は膜の新生、脂質滴の動態、オルガネラ膜組成の維持に寄与し、その結果として脂質恒常性に結び付いた分泌輸送やストレス応答にも影響を及ぼす。ホスファチジルコリン代謝の破綻は、膜シグナル伝達プラットフォームの変化や脂質リモデリングを介して、代謝機能障害や腫瘍性の表現型に関与すると考えられている。したがってCHPT1は、リン脂質フラックス、小胞体膜生物学、ならびに脂質関連疾患モデルにおける遺伝子型から表現型への関係を検討する遺伝子編集研究において有用な標的である。

CHPT1 CRISPR活性化プラスミド（h2）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CHPT1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CHPT1 CRISPR 活性化プラスミド (h2) は、ヒト細胞株における CHPT1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCHPT1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CHPT1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCHPT1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCHPT1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCHPT1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCHPT1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。