CHMP1B Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406531

Visão geral

CHMP1B (proteína 1B de corpos multivesiculares carregada) é um componente central da maquinaria ESCRT-III, que impulsiona eventos de remodelação de membrana necessários para a triagem endossomal e a biogênese de corpos multivesiculares. Por meio de vias dependentes de ESCRT, a CHMP1B contribui para a redução da atividade de receptores, o tráfego para lisossomos, a dinâmica de membranas relacionada à autofagia e a conclusão da abscisão citocinética. A atividade adequada de CHMP1B ajuda a manter a proteostase e a homeostase de sinalização ao determinar o destino de cargas ubiquitinadas e de proteínas de membrana. A desregulação da função do ESCRT-III, incluindo alterações no tráfego dependente de CHMP1B, é frequentemente estudada em contextos de processos neurodegenerativos, brotamento viral e alterações, associadas ao câncer, na sinalização de receptores de fatores de crescimento.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO CHMP1B (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene CHMP1B em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do CHMP1B, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do CHMP1B na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína CHMP1B.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de CHMP1B para a investigação da sinalização de CHMP1B, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) CHMP1B críticos para a função CHMP1B
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos CHMP1B para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo CHMP1B Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo CHMP1B Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus CHMP1B. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo CHMP1B Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR CHMP1B (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia CHMP1B para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo CHMP1B definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.