Centriolin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-404195

概要

CNTRLは、中心体およびミッドボディに局在する足場タンパク質セントリオリンをコードしており、中心体の成熟、有糸分裂の進行、そして細胞質分裂の完了に必要です。セントリオリンは、母中心小体およびミッドボディにおけるタンパク質複合体のリクルートと組織化を支え、紡錘体の適切な機能とアブシジョン（最終切断）を担保する微小管ベースの構造を協調的に制御します。CNTRLの機能が損なわれると、中心体の恒常性が乱れ、細胞質分裂不全や染色体不安定性を促進し得ます。これらはヒト細胞モデルにおける異数性や増殖ストレスの研究に関連する過程です。そのためCNTRLは、中心体制御、細胞周期チェックポイント、分裂面制御を調べるうえで有用なターゲットとなります。

Centriolin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCNTRL遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CNTRL内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CNTRLのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Centriolinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Centriolinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CNTRL欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Centriolinの機能に不可欠なCNTRLエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CNTRLゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Centriolin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびCentriolin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CNTRL遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Centriolin HDRプラスミド（h）および Centriolin HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCNTRLホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCNTRL標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。