Centriolin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-404195

Übersicht

CNTRL kodiert Centriolin, ein am Centrosom und am Midbody lokalisiertes Gerüstprotein, das für die Reifung des Centrosoms, den Fortschritt der Mitose und den Abschluss der Zytokinese erforderlich ist. Centriolin unterstützt die Rekrutierung und Organisation von Proteinkomplexen am Mutterzentriol und am Midbody und koordiniert mikrotubuliabhängige Strukturen, die eine korrekte Spindelfunktion und die Abszission gewährleisten. Eine Störung von CNTRL kann die Centrosomenhomöostase beeinträchtigen, zu einem Versagen der Zytokinese führen und chromosomale Instabilität fördern – Prozesse, die für die Untersuchung von Aneuploidie und proliferativem Stress in humanen Zellmodellen relevant sind. CNTRL ist daher ein nützlicher Ansatzpunkt zur Erforschung der Centrosomenregulation, von Zellzyklus-Checkpoints und der Kontrolle der Teilungsebene.

Das Centriolin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CNTRL-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CNTRL-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CNTRL nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Centriolin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CNTRL-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Centriolin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CNTRL-Exone abzielen, die für die Centriolin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CNTRL-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Centriolin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Centriolin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CNTRL-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Centriolin HDR-Plasmid (h) und Centriolin HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CNTRL-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CNTRL-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.