CENP-H Double Nickase Plasmid (h): sc-404498-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CENP-H Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CENP-H Double-Nickase-Plasmid (h) und CENP-H Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CENPH abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: CENP-H: sc-365222
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CENP-H Double Nickase Plasmid (h) | sc-404498-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CENP-H Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404498-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CENPH kodiert das Zentromerprotein H (CENP‑H), eine zentrale Komponente des inneren Kinetochors, die für die präzise Chromosomensegregation während der Mitose erforderlich ist. CENP‑H ist an der Assemblierung und Stabilisierung von Zentromer/Kinetochor beteiligt, koordiniert die Rekrutierung und Aufrechterhaltung des CCAN‑Netzwerks und unterstützt die Mikrotubuli-Anheftung sowie die Zuverlässigkeit des Spindelkontrollpunkts. Eine Störung von CENPH beeinträchtigt die Kinetochorfunktion und führt zu Chromosomen-Fehlausrichtung, zurückbleibenden Chromosomen und Aneuploidie – Prozesse, die eng mit genomischer Instabilität verknüpft sind. Eine veränderte Regulation von Zentromer- und Kinetochor-Signalwegen, einschließlich CENPH-assoziierter Komplexe, wird häufig im Zusammenhang mit Proliferationsdefekten und Phänotypen chromosomaler Instabilität untersucht, die für die Krebsbiologie und Entwicklungsstörungen relevant sind.
CENP-H Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CENPH-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CENPH abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CENPH-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CENPH-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.