CENP-F CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402178

概要

CENPFは、後期G2期から有糸分裂期にかけて蓄積し、細胞分裂における染色体整列、スピンドルチェックポイントのシグナル伝達、そして正確な染色体分配を協調的に制御する、キネトコア関連の大型タンパク質CENP-Fをコードしています。CENP-Fはキネトコアでの微小管結合に寄与するとともに、中心体機能や紡錘体ダイナミクスを支え、有糸分裂の進行およびゲノム安定性に関わる中核的経路と結び付いています。CENPFの発現や局在の異常は、染色体不安定性や増殖能の変化と関連し、これらはがん生物学で頻繁に検討される特徴です。CENP-Fは細胞周期状態のマーカーとしても用いられ、ヒト細胞における核構造や有糸分裂ストレス応答での役割についても研究されています。

CENP-F CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCENPF遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CENPF内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CENPFのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CENP-Fタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CENP-Fシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CENPF欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CENP-Fの機能に不可欠なCENPFエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CENPFゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CENP-F CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびCENP-F CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CENPF遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CENP-F HDRプラスミド（h）および CENP-F HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCENPFホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCENPF標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。