CENP-C Double Nickaseプラスミド (h): sc-403000-NIC

CENPCは、セントロメアタンパク質C（CENP-C）をコードする遺伝子である。CENP-Cはセントロメアクロマチンに結合する内側キネトコアの中核構成要素で、微小管の安定した結合に必要な、恒常的セントロメア関連ネットワーク（constitutive centromere-associated network）の構築・組織化を助ける。CENP-Cはキネトコアの組み立てとスピンドルチェックポイントのシグナル伝達を協調させ、有糸分裂における染色体の正確な赤道面への整列（congression）と分配を保証し、セントロメアの同一性を細胞周期の進行と結び付けている。CENP-C依存的なキネトコア構造が破綻すると、染色体の誤分配や異数性を引き起こし、これらは増殖性疾患にしばしば伴うゲノム不安定性と関連する。そのためCENP-Cは、セントロメア生物学、有糸分裂の忠実性、ならびにクロマチン構造の制御と染色体継承を結び付ける機構の研究において広く解析されている。

CENP-C ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CENPC 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CENPC内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CENPCの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CENPCが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。