CEL Plasmide Double Nickase (h): sc-403176-NIC

Il gene umano **CEL** codifica la **lipasi carbossil esterasica**, un glicoenzima secreto noto soprattutto per l’idrolisi degli esteri del colesterolo e dei trigliceridi introdotti con la dieta, contribuendo all’assorbimento intestinale dei lipidi. L’attività di CEL interseca le vie di gestione dei lipidi modellando il pool di colesterolo libero, acidi grassi e monoacilgliceroli disponibili per l’assemblaggio delle lipoproteine e per la segnalazione metabolica a valle. Nel pancreas esocrino, CEL fa parte del repertorio di enzimi digestivi e può influenzare la composizione dei ligandi di origine lipidica che modulano risposte infiammatorie e metaboliche. Alterazioni della funzione o dell’espressione di CEL sono state associate a una disregolazione del metabolismo lipidico e a fenotipi pancreatici o metabolici, rendendolo un bersaglio rilevante per studi meccanicistici sulla digestione dei lipidi, sulla biologia della secrezione e sullo stress metabolico associato alle malattie.

CEL Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CEL nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CEL. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CEL. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CEL interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.