CECR2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-405018-ACT

CECR2 kodiert ein chromatinassoziiertes Protein, das als Transkriptionsregulator wirkt, indem es über bromodomänenabhängige Erkennung acetylierter Histone die epigenetische Zustandslage mit Genexpressionsprogrammen verknüpft. Es wird mit Chromatin-Remodeling sowie der Koordination von Entwicklungs- und Differenzierungsprozessen in Verbindung gebracht; beschrieben wurden unter anderem Rollen bei der Entwicklung des Neuralrohrs und bei der Steuerung transkriptioneller Netzwerke. Eine veränderte CECR2-Aktivität wurde mit fehlregulierter epigenetischer Signalgebung in krebsrelevanten Prozessen assoziiert, darunter Invasion, inflammatorische Signalwege und Zellzustandsübergänge. Als nukleärer Chromatinfaktor wird CECR2 hinsichtlich seines Beitrags zur Linienfestlegung, Transkriptionsgenauigkeit und krankheitsassoziiertem Umbau des Epigenoms untersucht.

CECR2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CECR2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CECR2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CECR2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CECR2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CECR2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CECR2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CECR2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CECR2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CECR2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.