CEACAM1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-417666-LAC

CEACAM1 (molecola di adesione cellulare 1 correlata all’antigene carcinoembrionario) è un recettore della superfamiglia delle immunoglobuline espresso su cellule epiteliali, cellule endoteliali e su diversi sottogruppi di leucociti, dove media l’adesione cellula‑cellula e la segnalazione dipendente dal contatto. Attraverso motivi ITIM citoplasmatici e interazioni con chinasi della famiglia Src e con fosfatasi quali SHP‑1/SHP‑2, CEACAM1 modula vie che controllano la segnalazione dei recettori immunitari, la funzione di barriera, l’apoptosi e il metabolismo cellulare. CEACAM1 contribuisce alla regolazione delle risposte immunitarie innate e adattative, includendo la segnalazione inibitoria nelle cellule T e nelle cellule NK, e influenza programmi angiogenici e infiammatori nei microambienti tissutali. Un’espressione o una segnalazione di CEACAM1 deregolata è stata associata ad alterazioni della sorveglianza immunitaria, a meccanismi di malattia infiammatoria e a fenotipi legati al cancro, supportandone l’uso come nodo meccanicistico negli studi di immunologia tumorale e biologia epiteliale.

Le particelle di attivazione lentivirale CEACAM1 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di CEACAM1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale CEACAM1 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione CEACAM1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di CEACAM1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo CEACAM1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.