Cdx1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402522-ACT

CDX1 codifica o fator de transcrição homeobox do tipo caudal Cdx1, um regulador de ligação ao DNA específico de sequência que ajuda a estabelecer o padrão ântero-posterior e orienta a diferenciação do epitélio intestinal. Em células humanas, CDX1 integra-se a redes de sinalização do desenvolvimento, como Wnt/β-catenina e programas transcricionais responsivos ao ácido retinoico, para controlar a expressão gênica restrita a linhagens e a maturação epitelial. Alterações na expressão de CDX1 têm sido associadas a mudanças de destino epitelial e a estados de diferenciação desregulados em tecidos gastrointestinais, tornando-o um recurso molecular útil para estudar a reprogramação transcricional em modelos relevantes para doenças. Como regulador homeobox, Cdx1 também é utilizado para investigar como elementos cis-regulatórios e o contexto da cromatina moldam decisões de identidade celular.

Cdx1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CDX1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Cdx1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CDX1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CDX1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Cdx1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CDX1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Cdx1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Cdx1 em células tumorais com expressão de CDX1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.